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運輸條件:低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準品(8000 nmol/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外,有時常可見到一些錯誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)如標(biāo)本的影響,對這一方面上海恒遠生物來為大家細細解讀:
1. 溶血標(biāo)本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性?赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以完全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽性。所以嚴重溶血標(biāo)本禁用。
2. 標(biāo)本受細菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
3. 標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強烈振蕩。
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試劑的準備
1. 標(biāo)準品:標(biāo)準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
400 pg/ml | (6號標(biāo)準品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
200 pg/ml | (5號標(biāo)準品) | 100ul的原倍標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液 |
100 pg/ml | (4號標(biāo)準品) | 100ul的5號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液 |
50 pg/ml | (3號標(biāo)準品) | 100ul的4號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液 |
25 pg/ml | (2號標(biāo)準品) | 100ul的3號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液 |
12.5 pg/ml | (1號標(biāo)準品) | 100ul的2號標(biāo)準品加入100ul的標(biāo)準品稀釋液 |
0 pg/ml | (空白對照) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
ELISA浸泡式洗滌:
1. 吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
2. 用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
3. 浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
4. 吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
5. 重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
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更新時間:2024/12/9 9:53:43
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